Les tests biologiques de diagnostic

Diagnostic hématologique en cas d'hémolyse

En cas d'hémolyse, au tout début de celle-ci après agression d'un agent oxydant, on peut mettre en évidence au microscope dans les globules rouges des corps de Heinz qui sont des précipités d'hémoglobine dénaturée. Leur présence est rendue visible par des colorants comme le crystal violet.

Diagnostic biochimique permettant le dépistage néonatal du déficit en G6PD

  • Le test le plus utilisé est le " Fluorescent spot test " ou spot test de Beutler retenu par l'International Committee of Standardization in Haematology (Beutler, Br J Haematol, 1979). Ce test dérive du dosage de référence. C'est un test visuel qui distingue les sujets fortement déficitaires (absence de fluorescence en lumière UV) des sujets normaux (forte fluorescence).

    Ce test est facilement réalisable par prélèvement de sang fait sur papier. Il peut se faire chez le nourrisson par microponction au talon, ou à la naissance sur le sang du cordon.
    Ce test permet `de dépister sans ambiguité les hémizygotes et les homozygotes pour le déficit en G6PD.

    Ce "spot test" consiste a faire incuber un hémolysat en présence de glucose 6-phosphate (G6P) et de NADP puis à en déposer une goutte sur un papier filtre. La production de NADPH est attestée par l'apparition d'une tâche fluorescente lorsque le papier est examiné à la lumière ultra-violette.

    Le prélèvement du sang doit être transporté le plus rapidement possible au laboratoire. Il peut aussi être conservé au froid. Ces deux précautions sont nécessaires. Il est aussi possible de déterminer l'activite enzymatique sur un prélèvement vieux de vingt-quatre heures conservé à +4 °C sous forme de sang total. Si les conditions de transport et de conservation ne sont pas respectées, les résultats peuvent être faussement positifs.

  • Le test de référence permettant la mise en évidence du déficit en G6PD est fait par le dosage spectrophotométrique de l'activité enzymatique. Il doit toujours être pratiqué pour confirmer un " spot test " positif.

    Il est fait à partir d'un prélèvement de sang dans un tube contenant un anti-coagulant, afin de classer le degré de déficit en sévère (moins de 5 p. 100) ou modéré (entre 5 et 10 p. 100) de l'activité enzymatique normale.

    Son principe consiste à mesurer l'augmentation de l'absorption en ultra-violet à 340 mm correspondant à l'apparition du NADPH formé lors de I'incubation de l'hémolysat en présence de G6P et de NADP.

    La valeur normale de l'activité de la G6PD varie selon les conditions du dosage (par exemple de la température) et doit donc être précisée par le laboratoire.

  • Le test de stabilité du glutathion réduit (peu utilisé actuellement) met en évidence de facon indirecte un déficit en G6PD. Le test se pratique en faisant incuber le sang avec de l'acétyl-phénylhydrazine. Dans le sang du sujet normal, le taux du glutathion réduit s'abaisse peu, alors que l'on observe une chute importante dans le sang des sujets présentant le déficit enzymatique.

    Ce test mesure le taux de formation de glutathion réduit dans les globules rouges. L'activité des globules rouges est exprimée en Unités Internationales (micromoles de glutathion réduit produit par minute) par gramme d'hémoglobine. Dans les globules rouges normaux, le taux de l'activité de la G6PD mesuré à 30°C est de 7 à 10 UI/g d'hémoglobine; dans les globules déficients le taux baisse à 2 ou 3 UI/g d'hémoglobine.

    Test de biologie moléculaire par l'étude de l'ADN

    Il décèle la ou les mutations génétiques sur l'ADN, montre le génotype de l'individu et permet la connaissance de la variante en cause, mais c'est encore un test coûteux, pratiqué seulement dans certains laboratoires spécialisés, et qui ne peut être automatisé pour le moment.


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